1.核酸提取
1.1什么是核酸
核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和转移RNA(tRNA)。
1.2核酸提取纯化原则和要求
保证核酸一级结构完整型; 排除其他分子的污染;
1.3.常见的核酸提取方法
a、溶液型抽提溶液型抽提是比较经典的提取方法,几乎都含有去污剂(如 SDS )和盐(如Tris、EDTA、NaCl 等)。盐的作用,除了提供一个合适的裂解环境,还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如 EDTA )、维持核酸结构的稳定(如 NaCl )等。去污剂则是通过使蛋白质变性,破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质,从而实现核酸游离在裂解体系中。这种方法虽然成本较低,但较为繁琐,提取的核酸质量也较为一般。
b、柱式抽提
柱式抽提是用于微量核酸分离纯化的较为简单的方法,其基本原理是利用裂解液促使细胞破碎,使细胞中的核酸释放出来。 把释放出的核酸特异地吸附在特定的硅载体上,这种载体只对核酸有较强的亲和力和吸附力,对其他生化成分如蛋白质、多糖、脂类则基本不吸附,因而在离心时被甩出柱子。再把吸附在特异载体上的核酸用洗脱液洗脱下来,分离得到纯化的核酸。
其成本较低,但提取质量较好,是目前市场的主流提取方法。
c、磁珠法提取
磁珠纯化法与硅胶膜离心柱的原理基本相同,运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在 Chaotropic 盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的 DNA 和 RNA 分离出来。